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1. 預(yù)期用途

材料 18/130 是從 MOLT-4 人類細(xì)胞系中提取的冷凍干燥、純化的基因組 DNA (gDNA)。該材料具有 TP53 c.916C>T (R306*)、NRAS c.34G>T (G12C)、PTEN c.795delA (K267fs*9) 和 MAP2K1/MEK1 c.199G>A (D67N) 的相關(guān)共識變異百分比變體和共有變體以及每個二倍體人類基因組質(zhì)量的總 TP53、NRAS、PTEN、MAP2K1/MEK1 拷貝數(shù)。

可以通過應(yīng)用計算（參見附錄 I）稀釋材料，以產(chǎn)生上述任何變體的一致變體百分比范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)。該材料旨在用作校準(zhǔn)二級標(biāo)準(zhǔn)、試劑盒和測定的主要標(biāo)準(zhǔn)。該材料不用作運(yùn)行控制。該材料經(jīng)過外部實(shí)驗室測試，表明適合作為下一代測序 (NGS) 和數(shù)字 PCR (dPCR) 的標(biāo)準(zhǔn)。除了上述臨床相關(guān)變體外，該材料還包括可用于 NGS 驗證的非臨床相關(guān)變體化驗（見附錄 II）。該材料由世界衛(wèi)生組織 (WHO) 生物標(biāo)準(zhǔn)化專家委員會于 2019 年制定，為 WHO 第一個 MOLT-4 癌癥基因組國際標(biāo)準(zhǔn)，NIBSC 材料代碼 18/130。

NIBSC 18/130 MOLT-4 癌癥基因組(標(biāo)準(zhǔn)品）

2. 注意

該制劑不適用于人類食物鏈中的人類或動物。

該制劑含有人類來源的材料，經(jīng)血清學(xué)檢測發(fā)現(xiàn) HIV 1 和 2 Ab/Ag 檢測和 HBsAg（Hep b 表面抗原）陰性，NAT（核酸檢測）檢測發(fā)現(xiàn) HCV 陰性。

但是，不能消除活病毒存活的可能性。與所有生物來源的材料一樣，這種制劑應(yīng)被視為對健康有潛在危害。應(yīng)根據(jù)您自己實(shí)驗室的安全程序使用和丟棄它。此類安全程序應(yīng)包括戴防護(hù)手套和避免產(chǎn)生氣溶膠。打開安瓿或小瓶時應(yīng)小心謹(jǐn)慎，以免割傷。

3. 單元

該材料在一項涉及 35 個實(shí)驗室和 38 種測試方法的國際合作研究中進(jìn)行了測試。從 NGS 和 dPCR 獲得基因型和共有突變百分比（表 1）。最終用戶能夠使用基于每個二倍體人類基因組質(zhì)量的變體和總基因拷貝數(shù)的稀釋公式進(jìn)一步稀釋材料（使用野生型材料 18/164，或校準(zhǔn)到材料 18/164 的另一種野生型基因組 DNA） ，以在可以實(shí)現(xiàn)測定校準(zhǔn)的較低變異百分比范圍內(nèi)達(dá)到進(jìn)一步的標(biāo)準(zhǔn)

4. 內(nèi)容

生物材料原產(chǎn)國：英國。編碼安瓿含有大約 5 μg 從人類細(xì)胞系中提取的凍干純化基因組 DNA。使用“鹽析”方法提取 gDNA，并在冷凍干燥前用 5mg/ml 海藻糖在 Tris-EDTA 緩沖液中稀釋。

NIBSC 18/130 MOLT-4 癌癥基因組(標(biāo)準(zhǔn)品）

5. 存儲

將所有未開封的凍干材料安瓿存放在 -20°C 或以下。

請注意：由于凍干材料固有的穩(wěn)定性，NIBSC 可能會在環(huán)境溫度下運(yùn)輸這些材料。

6. 開瓶指南

DIN 安瓿瓶有一個“易開”顏色的壓力點(diǎn)，窄的安瓿桿在此與較寬的安瓿瓶主體相連。各種類型的安瓿破碎機(jī)可商購獲得。要打開安瓿，輕輕敲擊安瓿以收集底部（標(biāo)記）端的材料，并按照安瓿破碎器隨附的制造商說明進(jìn)行操作。

NIBSC 18/130 MOLT-4 癌癥基因組(標(biāo)準(zhǔn)品）

7. 材料的使用

在重新配制之前，不應(yīng)嘗試稱量凍干材料的任何部分

a。如上文第 6 節(jié)所述打開安瓿瓶。

b。在室溫下用 100μl 無核酸酶水復(fù)溶凍干材料。

C。使用移液器將樣品轉(zhuǎn)移到無核酸酶管中，確保收集到最大可用體積。

d。讓材料在室溫下復(fù)溶 1 小時，然后用移液管充分混合。 1x Tris-EDTA 緩沖液中的 DNA 濃度現(xiàn)在約為 50ng/μl，但建議在使用前使用自己的定量方法進(jìn)行確認(rèn)。不必?fù)?dān)心材料中可能出現(xiàn)的白色斑點(diǎn)。

e.這種變體材料可以與材料 18/164（野生型）結(jié)合以產(chǎn)生任何選擇的變體百分比的標(biāo)準(zhǔn)；見附錄 I.f。將所需的量添加到您的檢測中。材料可以進(jìn)一步稀釋（用無核酸酶水或合適的緩沖液），以達(dá)到適合您檢測的 DNA 濃度。

G。應(yīng)在同一測定中分析初級和二級標(biāo)準(zhǔn)，以將值分配給二級標(biāo)準(zhǔn)。